Технологии прошлого

СОДЕРЖАНИЕ:

1. Взятие крови

2. Разведение крови

3. Счетные камеры

4. Сетки по авторам

5. Подсчет форменных элементов

    Подсчет кровяных телец в середине прошлого века представлял собой довольно трудоемкий процесс. Подсчитывание кровяных телец производилось в счетной камере. Для этого надо было выполнить ряд манипуляций:

— укол пальца;

— взятие крови в смеситель;

— разведение крови соответствующим раствором;

— нанесение капли разведенной крови на сетку счетной камеры;

— последний этап — все это сосчитать (то же не так просто), а после произвести вроде как бы несложные арифметические действия.    

1Взятие крови

    Укол пальца производился особым инструментом — иглой Франка.

По сравнению с обычными иглами ее преимущество состояло в том, что острие погружалось на нужную глубину в зависимости от толщины кожи. Взятие крови производилось при помощи специальных пипеток-смесителей (меланжеров). Она представляла собой капиллярную трубку с делениями, расширяющуюся на конце и образующую ампулу.

Для учета красных и белых телец употребляли разные смесители. Для учета эритроцитов предназначался смеситель с капилляром более тонкого калибра и объемистой ампулой. Для лейкоцитов — шире и ампула была менее объемной.

2    Разведение крови

    Для исследования эритроцитов использовались:

— 3% раствор поваренной соли;

— жидкость Гайема (5 граммов сулемы, 10 г хлористого натрия, 37,5 г сернокислого натрия — растворить в воде и довести объем жидкости до 1 литра). В жидкости Гайема эритроциты сохранялись дольше. Так же рекомендовалось подмешивать в раствор немного краски (метилвиолет или генцианвиолет).  Это давало возможность при подсчете форменных элементов не спутать эритроциты с лейкоцитами.

    Для подсчета красных кровяных телец через резиновую трубку, прикрепленную к смесителю, насасыванием набирали кровь из укола до метки 0,5. После кончик смесителя опускали в чашечку, наполненную раствором поваренной соли либо жидкостью Гайема и насасывали ее до метки 101. Это составляло разведение в 200 раз. Быстро встряхивали смеситель в течении 3 минут в различных направлениях.

Для исследования белых кровяных телец (лейкоцитов) использовали 5% раствор уксусной кислоты (она растворяла эритроциты, но не повреждала лейкоциты). Кровь набирали до метки 1,0, затем насасывали разводящий раствор до метки 11. Это составляло разведение в 10 раз. После встряхивали смеситель точно так же. Затем наносили каплю разведенной крови на сетку счетной камеры. Для этого несколько капель выливали из смесителя, а использовалось только то содержимое, которое заключалось в ампуле (оно было хорошо перемешано с раствором).

3Счетные камеры

    Счетные камеры представляли собой толстое предметное стекло. В нем была укреплена особая стеклянная пластинка с выгравированной в ней сеткой. Вокруг сетки была наложена еще стеклянная пластинка толщиной 0,1 мм. На этой пластинке и укреплялось над сеткой покровное стекло. высота пространства между сеткой и покровным стеклом (глубина сетки) составляла 0,1 мм. Покровные стекла применялись шлифованные. они имели абсолютно ровную поверхность. Покровные стекла нужно было притирать к камере так плотно, пока не показывались ньютоновы кольца (радужные круги по сторонам от сетки).

  Различали два типа счетных камер:

 Камера Тома-Цейсса 

    Пластинка, на которую была наклеена сетка — круглая. Вокруг нее располагалась другая, более толстая, выходящая своей поверхностью за поверхность круглой (внутренней) так, что высота между пластинкой с сеткой и краями окружающей первой, более толстой пластинки, равнялось 0,1 мм. Капля наносилась на центральную пластинку с сеткой. Затем порывалась стеклом. Стекло притиралось до появления ньютоновых колец. Капля должна была быть по объему такой, чтобы равномерно закрыть всю сетку.

 Камера Бюркера 

    Представляла собой толстое предметное стекло. В центре выгравированы две сетки, помещающиеся поперек стекла, окруженные желобками по бокам и между ними. Наружные края боковых желобков приподняты так, что высота между плоскостью сетки и верхними краями равнялось 0,1 мм (глубина камеры). Покровное стекло накладывалось до нанесения капли в один из желобков. По капиллярности она заполняла сетку.

4Сетки по авторам

    Сетки так же были разными:

 Сетка Тома   

    Состояла из 16 больших квадратов. В них содержалось 16 маленьких квадратов. Большие квадраты отделены друг от друга «тройными» линиями. Вся сетка состояла из 16 плюс 4 рассеченных малых квадрата в ряд, то есть из 20 малых квадратов в ряду, расположенных в 20 рядах. Итого: 400 малых квадратов. Сетка Тома была достаточна для подсчета эритроцитов, но для счета лейкоцитов была маловата.

 Сетка Тюрка  

    Состоит в центре из сетки Тома, но имеет площадь значительно больше, а именно еще 8 таких площадей.Сетка содержит 144 больших квадрата.

 Сетка Предтеченского  

   Имеет 100 больших квадратов, часть из которых разделена на малые. Притом равномерно в разных отделах сетки.

 Сетка Горяева    

    Состоит из 225 больших квадратов по 15 в каждом из 15 рядов.

 Сетка Бюркера   

    Состояла так же из 144 больших квадратов (напоминала сетку Тюрка). При подсчете эритроцитов использовались равномерно распределенные по пространству сетки малыми квадратами.

А дальше — сломать мозг, как все было сложно!

5Подсчет форменных элементов

    Подсчет красных и белых телец (эритроцитов и лейкоцитов) в сетке производился спустя 3 минуты после заполнения камер каплей. Считались все клетки, расположенные внутри квадрата. Так же сюда присчитывались клетки, пересекаемые пограничными линиями пополам. Но только те из них, которые лежали либо на верхней и левой, либо на нижней и правой линиях. Клетки, лежащие большей свое половиной вне данного квадрата не считались.     

    Наибольшую популярность получила сетка Горяева: Эритроциты подсчитывались по малым квадратам. В сетках Горяева выбирали большие квадраты, состоящие из 16 малых и сосчитывали обычно 5 больших квадратов (то есть 80 малых). Лучше всего было выбирать квадраты, лежащие в разных местах сетки (чтобы уменьшить неточность от неравномерного распределения эритроцитов в сетке).

    В сетке Бюркера пользовались малыми квадратами, расположенными между большими ( в местах пересечения пространств, разделяющих большие квадраты). В одном ряду по всей сетке будет 10 малых квадратов; обычно считали малые квадраты в шести рядах плюс еще 2 каких-нибудь малых квадрата в седьмом ряду, что дает так же 80 квадратов. Расчет вели следующим образом: рассчитав эритроциты в 80 малых квадратах, равных 16 большим, получают среднее число эритроцитов, содержащихся в малом квадрате. Так как объем малого квадрата равен 1/4000 мм кубических, то в 1 мм куб.смеси, в которой сосчитываются эритроциты, таковых будет в 4000 раз больше, чем в одном малом квадрате. Так как взятую кровь разводят в смесители (в 200 раз), то полученную цифру надо умножить на 200. Например: в 80 малых квадратов 400 эритроцитов. Соответственно в одном малом квадрате их должно быть: 400 : 80 = 5; в 1 мм. куб. смеси из меланжера 5 Х 4000 = 20000; а в 1 мм куб. крови: 20000 Х 200 = 4000000. Практически к числу эритроцитов, сосчитанных в 80 малых квадратах (или 5 больших), приписывают четыре нуля. Счет лейкоцитов производился по большим квадратам:

    В камере Тома подсчитывались лейкоциты, лежащие по всей сетки (т.е. в 400 малых квадратах); считали не менее 3 капель. В сетке Бюркера считали по 100 большим квадратам (96 в 8 рядах и еще 4 квадрата в каком-нибудь девятом ряду); ряды брали не рядом. Лучше всего подсчитывали все лейкоциты, лежащие в пределах сетки; объем сетки равен 0,9 мм куб. Следовательно, для получения числа лейкоцитов в 1 мм куб. крови достаточно найденное количество лейкоцитов по всей сетки умножить на 10/9 и на разведение (10 или 20).

    В сетке Горяева сосчитывалось по 100 больших квадратов, обычно избирали «пустые» (не разделенные на малые), они  расположены группами по четыре в ряд, всего в сетке их 25. Полученное число лейкоцитов в 100 больших квадратах делили на 100, потом на 16. Найденное среднее число лейкоцитов на один малый квадрат умножали на 10 или 20 (в зависимости от разведения 1 : 10 или 1 : 20) и на 4000.

    Как все-таки хорошо, что этим всем сейчас занимаются гематологические анализаторы!

0

Автор публикации

не в сети 5 месяцев

maks

0
Комментарии: 0Публикации: 1Регистрация: 07-02-2020

Оставьте комментарий

Авторизация
*
*

Регистрация
*
*
*

два − один =

Генерация пароля